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現(xiàn)將ELISA試劑盒實驗操作中注意事項總結如下
更新時間:2015-01-04   點擊次數(shù):1058次

     我們必須對影響ELISA試劑盒實驗結果各因素有一定的認識。的 試劑 ,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA試劑盒檢測結果準確可靠的必要條件。如不注意,就易出現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象(就是空白、陰性、陽性對照以及室內質控孔結果正常,而標本孔的OD值卻明顯偏高)是各個廠家洗板機調試中經常遇到的問題。以期給大家?guī)硪恍﹩l(fā),以改善洗板機的安裝調試水平,提高臨床檢測質量。也有廠家堅持試劑盒高的流行病學敏感度,科學地對待反應結果?;蚬こ炭乖^合成肽抗原有*的*性,就HCV-ELISA 試劑盒來講,*代產品為合成肽抗原,主要是HCV特異性抗原決定簇的肽片段;第二代產品包被的抗原既有基因工程抗原又有合成肽,只是當時的基因工程抗原不全,僅包括了HCV 的核心區(qū)片段;第三代產品基本上采用了基因工程抗原,而且這些抗原包括更多、更穩(wěn)定、純度更高的HCV 特異性抗原。第三代 試劑 的敏感度大大提高了。

基因工程抗原與合成肽抗原的區(qū)別如下:

1)要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA試劑盒測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色。

(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。

(3)血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應在-70℃以下。

(4)冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。ELISA試劑盒標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用,從而引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。

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