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elisa試劑盒試驗預備剖析保溫知識
更新時間:2018-01-15   點擊次數(shù):1414次

ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶結合物后??乖贵w反響的完結需求有必定的溫度和時刻,這一保溫進程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA 中似不恰當。ELISA 屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)作。elisa試劑盒以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結合的時機,只需zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個逐步平衡的進程,因此需經(jīng)分散才干到達反響的結尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結合也相同如此。這就是為什么ELISA 反響總是需求必定時刻的溫育。
ELISA試劑盒溫育常選用的溫度有 43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結合的適宜溫度。在樹立ELI SA 辦法作反響動力學研討時,試驗標明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2 小時,產(chǎn)品的生成可達。為加速反響,可進步反響的溫度,有些試驗在 43℃進行,但不宜選用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為*,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中,以形成zui多的沉積。但因所需時刻太長,在ELISA 中一般不予選用。
elisa試劑盒保溫的方法除有的 ELISA 儀器附有特制的電熱塊外,一般均選用水浴,可將ELISA 板置于水浴箱中,ELISA 板底應貼著水面,使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA 板應放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性杰出的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui終將ELISA 板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)則的溫度,特別是在氣溫較低的時分更應如此。無論是水浴仍是濕盒溫育,反響板均不宜疊放,以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響,操作時的室溫應嚴厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi),標準室溫溫度是指 20-25℃,但具體操作時可根據(jù)說明書的要求操控溫育。室溫溫育時,ELISA 板只需平置于操作臺上即可。應留意溫育的溫度和時刻應按規(guī)則力求。為確保這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板一起測定。
一個杰出的試驗操作環(huán)境能夠確保ELISA試劑盒測定結果更。試驗操作的嚴謹性與試驗操作標準密不可分,未使用的試劑應貯存于2-8℃,使用時應回溫到室溫(20-25℃)。切忌不同批次的試劑混合使用,要常常查看酶標儀和微量移液器的精度盒預備度,這樣才干確保試驗的可操作性。

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